鸡白痢的检疫
一、 快速全血平板凝集反应1.主要材料:
(1)鸡白痢全血凝集反应抗原,由农业部中国兽药监察所购得,或其他来源的合格产 品。抗原为福尔马林灭活的细菌悬液,每毫升含菌100亿。
(2)用具:玻璃板、注射针头、带柄不锈金属丝环(环直径约4.5mm)、巴氏滴管。
2.操作方法先将抗原瓶充分摇匀,用滴管吸取抗原,垂直滴一滴(约0.05ml)于玻 片上,然后使用注射针头刺破鸡的翅静脉或冠尖,以金属环沾取血液一满环(约0.02ml)混 入抗原内,随即搅拌均匀,并使散开至直径约2cm为度。
3.结果判断:
(1)抗原与血清混合后在2min内发生明显颗粒状或块状凝集者为阳性。
(2)2分钟以内不出现凝集,或出现均匀一致的极微小颗粒,或在边缘处由于临干前 出现絮状者判为阴性反应。
(3)在上述情况之外而不易判断为阳性或阴性者,判为可疑反应。
4.注意事项:
(1)抗原应在2~15℃冷暗处保存,从杀菌之日算起有效期6个月。
(2)本抗原适用于产卵母鸡及1年以上公鸡,幼龄鸡敏感度较差。
(3)本试验应在20℃以上室温中进行。
二、血清凝集反应
1.血清试管凝集反应
(1)主要材料
鸡血清样品:以20或22号针头刺破鸡翅静脉,使之出血,用一清洁、干燥的灭菌试 管靠近流血处,采集2ml液,斜放凝固以析出血清,分离出血清,置4℃待检。
抗原:试管凝集反应抗原,必须具有各种代表性的鸡白痢沙门氏菌菌株的抗原成分,对 阳性血清有高度凝集力,对阴性血清无凝集力。固体培养中洗下的抗原需保存于0.25%~ 0.50%石炭酸生理盐水中,使用时将抗原稀释成每毫升含菌10亿,并把pH调至8.2~8.5, 稀释的抗原限当天使用。
(2)操作方法在试管架上依次摆3支试管,吸取稀释抗原2ml置第1管,吸取各lml
分置第2、3管。先吸取被检血清0.08ml注入第1管,充分混合后再吸取lml移入第2管,充分混合后吸取lml移人第3管,混合后吸出混合液lml舍弃,最后将试管摇振数次,使抗原—血清充分混合,在37℃温箱中孵育20h后观察结果。
(3)结果判断试管1、2、3的血清稀释倍数依次分别为1:25、1:50、1:100,凝集阳性者,抗原显著凝集于管底,上清液透明,阴性者,试管呈均匀混浊;可疑者介于前两者之间。在鸡1:50以上凝集者为阳性。在火鸡1:25以上凝集者为阳性。
2.血清平板凝集反应
(1)主要材料血清采集同试管凝集法;抗原与试管凝集反应者相同,但浓度比试管 法的大50倍,悬浮于含0.5%石炭酸的12%氯化钠溶液中。
(2)操作方法用一块玻板以蜡笔按约3cm2画成若干方格,每一方格加被检血清和抗 原各1滴,用牙签充分混合。
(3)结果判定观察30~60s,凝集者为阳性,不凝集者为阴性。试验应在10℃以上室 温进行。
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