少林寺 发表于 2008-8-8 11:56:01

禽支原体病的诊断

1.禽支原体的分离和鉴定
    (1)常用培养基
    液体增菌培养基
            鸡肉浸出汤               850ml   
            鸡、马或猪血清         150ml   
            葡萄糖                   10g
            酵母浸膏               10g
            青霉素G钾               100万单位
            10%醋酸铊溶液         2.5~5ml
            酚红                     25mg
    调pH至7.8,0.23mg滤腊过滤除菌。
    若培养滑液支原体,在上述培养基中加盐酸半胱氨酸0.1g,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)0.1g。
    固体培养基:上述成份中猪血清、盐酸半胱氨酸、NAD和青霉素0.22μrn过滤除菌,其余成分加1%优质琼脂,加热融化混匀后调pH至7.8,高压灭菌(121C),凉至50℃时,
将预热至50℃的滤过除菌成份加入,混匀后立即分装平皿或斜面。
    (2)采样和分离培养在感染的急性期(直到感染后60~90天)内上呼吸道支原体含量最高,可采5~10个气管或鼻孔裂隙样品,有气囊炎和滑液囊炎时可采病变部位样品,鸡胚采样应包括卵黄和部份卵黄囊。样品在较远距离运输到实验室之前应在现场接种肉汤培 养基。
    接处样品的肉汤培养基在37℃培养5~7天,如不见明显生长(培养基变黄),应盲传2~3次,每次取0.5~1.0ml培养液移种到新的培养基中,这样可提高分离率。将已有支原体生长的培养液接种到固体培养基上,置37℃高湿度空气条件下培养3~5天。如有鸡-毒支原体生长,可见细小(直径0.2~0.3mm)、光滑、园形、透明的菌落,带有特征性的致密突起的中心点,在放大镜或低倍显微镜下观察,如乳头状。选择单个菌落移植新的培养基上,可得到纯培养。
    (3)支原体的鉴定根据菌落的特征和姬姆萨氏染色,菌体为细小和多形性,可作出初步鉴定。支原体最常用的鉴定方法是生长抑制试验。将被检菌株的对数期液体培养物作10-1、10-2,、10-3稀释,每个稀释度涂布2个平板,在超净台内留置2~3h,使过多的水分蒸发掉;然后将会有抗血清的滤纸片平放在已接种的琼脂平板上,置37℃湿润空气中培养3~5天;若滤纸片周围出现大于lm的抑菌圈,则判为阳性,税明被检菌株是鸡毒支原体。
    支原体鉴定还可采用7日龄SPF鸡胚卵黄囊接处法。鸡毒支原体接种后5~7天引起    鸡胚死亡并产生特征性病变,即鸡胚呼吸道有干酪样渗出物;肝脾肿大,心包炎,或全身    水肿及肝脏坏死等,多次继代后病变更为明显。死亡的鸡胚液可通过HA和HI试验鉴定。
    2.鸡支原体病的检疫全血平板凝集反应
    (1)试验材料全血平板凝集反应用鸡支原体病检疫用染色抗原,阳性对照血清,玻璃或白瓷反应板,注射器和针头等其他器具。
    (2)将抗原充分摇匀后用带针头注射器吸取,在反应板的编号区划内滴2滴,约0.05ml;用带针头的注射器刺破待检鸡的翅静脉,吸少量血滴在同一区划内抗原的边缘,用牙签将血滴与抗原搅拌混合涂成直径约1.5~2.0cm的液面,轻轻摇动反应板,经l~2min判定。试验设阳性血清和抗原对照(抗原1滴加生理盐水1滴)。如待检物是血清,则1滴抗原加1滴血清,搅拌后经30s至lmin判定。
(3)抗原在与血滴搅拌后1~2min呈现紫色大的凝块,红细胞在液面下沉,则为强阳性,记号为“+++—++++”呈现较小的凝集块,或在液面呈大小不均的颗粒状凝集物,则为阳性,记号为“++”;菌体呈小颗粒状,多在液面边缘部分出现,则为可疑,记号为“+”;液面呈紫色混浊,菌体和红细胞逐渐下沉,或仅在边缘部分出现紫色色带,则为阴性,记号为“一”。试验中抗原和生理盐水混和后应无自凝作用,阳性对照血清的反应为“卅—卅”,试验在15~25℃条件下进行。

飞龙大将军 发表于 2008-8-9 12:45:29

学习

贾明 发表于 2008-8-9 22:08:01

学习了

张鸿 发表于 2008-8-11 06:37:43

学习学习

马谈 发表于 2008-8-12 12:31:33

谢谢

nnn 发表于 2008-8-12 21:32:24

谢谢彬哥,发表点看法,确诊支原体是不难,但是要买到纯正的特效兽药就很难了,很多兽药都是质量不稳定呀。

会飞的牛 发表于 2008-8-13 11:25:20

不错学习

zhy1860 发表于 2008-8-22 10:31:56

支原体病的治疗还是比较好治疗的。一般的大环内酯类类的药物就能治疗了,不过支原体病所带来的继发病比较难搞。尤其在鸡身上。如果引起肺泡破裂,气囊炎症,肺泡出血,出现的呼吸道就比较难治疗了。推荐一个方法,一个用麻杏石甘散修复肺泡。气囊炎通肾,加请肺止咳散,因为鸡没有汗腺,要排除言行渗出物只能通过肾脏的排泄和肺脏的咳出。可以参考一下。

河北鸡民 发表于 2008-8-22 11:12:35

彬哥你真好.学习了.

liyuanyuan 发表于 2008-8-22 12:52:44

挺好的,有意义

aiqingdu 发表于 2008-8-23 16:04:09

一般3-7日龄用药预防支原体

王毅 发表于 2008-8-24 21:08:50

学习了

小鸡吃米米 发表于 2008-8-27 18:30:24

什么是 NB学生见识了 ‘我收藏了’呵呵

qhmzxylzq 发表于 2008-8-28 10:33:41

:) 学习了

滴水藏海 发表于 2008-8-29 10:25:14

学习了
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