抗菌素的联合药敏试验
两种抗菌素同时使用时，可出现协同、颉颃、无关和耐药四种情况。为了有效地控制耐药菌株的产生，发挥抗菌素的协同作用，使用低浓度的抗菌素就可控制细菌，因此，在使用抗菌素前，必须进行抗菌素的联合药敏试验。各种抗菌素的应用组合如下表：
表6 各种抗菌素的应用组合
组别 抗菌素 抑菌种类
1组 链霉素、四环素、磺胺类 主要为革兰氏阴性杆菌
2组 多粘菌素
3组 红霉素、卡那霉素、庆大霉素
1组 青霉素、氯霉素、四环素 主要革兰氏阳性或阴性球
2组 红霉素、新生霉素、万古霉素 菌或革兰氏阳性杆菌
3组 新霉素、卡那霉素、万古霉素、庆大霉素
在做联合试验时，应先做其中某一组，若不敏感时，再做另外两组；若三组均不敏感时，则做第三组和第一组或第二组抗菌素联合试验，为了省时间，也可以同时做第一、二、三组抗菌素的联合敏感试验。 抗菌素的联合敏感试验有两种方法：纸条法和试管法。一、纸条法（一）、试验材料1．普通琼脂或血液琼脂古板。2．被试细菌。3．药敏试纸条。药敏纸条的制备：将新华1号滤纸剪成20mm*6mm的纸条，用铅笔写上抗菌素的名称或代号，每100条为1组，放在平皿内，高压灭菌、烘干。按“简易抗菌素药纸片的制备方法”的要求，先将抗菌素配成适宜的浓度（青霉素2000微克/毫升，链霉素、四环素、土霉素为20000微克/毫升，磺胺类药为20000微克/毫升），每100条纸片加抗菌素溶液4ml，浸透后，放在37度温箱中烘干，置冰箱中保存备用。
（二）、试验方法
1．用接种环（或灭菌棉拭子）取被试细菌的培养物，均匀地涂布于灭菌的普通琼脂或血液琼脂平板上。
2．用灭菌镊子把含药纸条按“田”字形垂直放在接种细菌的平皿上，各种抗菌素纸条的间距应为1—2mm，可将平皿放在预先划好的图案上，按画好的放纸条位置，准确地将纸条放在平板表面。
3．将琼脂平板置37度温箱中，培养24h，观察结果。
（三）、结果测定
1. 凡在两个垂直的纸条上出现垂直的抑菌时，即为两种药物具有无关作用。
2．凡在两个垂直的纸条上出现抑菌，但在两纸条之间有细菌生长者，即为两种药物具有颉颃作用。
3. 凡两个垂直的纸条出现抑菌，而生长的细菌呈大小不同的弧形者，即为两种药物具有协同作用或相加作用。在临床上应采用这两种抗菌素为宜。
二、试管法
（一）、试验材料
1．培养基：PH7.4蛋白胨水（要求过滤灭菌，透明、无沉淀物），如细菌对营养要求较高，可加0.5％无菌血清。血清琼脂平板。
2．抗菌素原液与原液的稀释液：用灭菌生理盐水，按表7的要求，配制成各种抗菌素的原液和原液和稀释液。抗菌素原液，置冰箱中可保存一个月。3．三磺胶原液：取磺胺嘧啶，磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶各1g，地起研碎，加10％氢氧化钠0.2ml和生理盐水24.8ml，配成4％的溶液，高压灭菌，以生理盐水将上清液稀释25倍，即成160mg％的原液。4．菌液：一般均用幼龄肉汤培养物（37度，18h）。（二）、试验方法1．作两种抗菌素联合敏感试验，每种抗菌素两个稀释度，有四种不同的组合。2．将选用的两种抗菌素原液及原液的稀释液按表8组合，分别加入4支10ml的培养基试管内。3．同时另取4支培养基试管，按表7的要求分别作成两种抗菌素的高浓度和低浓度管，进行单独敏感性试验。4．每管内加菌液0.05ml，于37度温箱中，培养18h。（三）、结果判定凡有细菌生长（培养物混浊）者为不敏感，培养物清晰透明者为抑制了细菌的生长。从所有透明（不生长菌）的培养物管内，取一接种环培养液，涂布于血液琼脂平板上，培养18h，记录菌落数。1．有效的单独抗菌素低浓度能抑菌，菌落数<50个。2．有效的联合抗菌素培养物应透明，菌落数<10个。3．协同作用单独抗菌素高浓度能抑菌，而联合抗菌素低浓度则可抑制细菌的生长。4．颉颃作用单独抗菌素反较联合抗菌素抑菌能力强。5．无关作用单独抗菌素与联合抗菌素的结果没有很大的差别。 表7抗菌素原液和原液的稀释液 抗菌素
原液 原液的稀释淮 高浓度管 低浓度管
（微克/毫升） （微克/毫升） （微克/毫升） （微克/毫升）
链霉素
氯霉素
四环素
多粘菌素
红霉素
新霉素
夹桃霉素
新生霉素
青霉素
杆菌肽
三磺胺
800 200 20 5
400 80 10 2
400 80 10 2
400 40 10 2
80 8 2 0.2
80 8 2 0.2
80 8 2 0.2
80 8 2 0.2
40u 4u 1u 1u
40u 8u 1u 0.2u
160mg％ 16mg％ 4mg％ 0.4mg％
表8两种抗菌素联合敏感试验培养基
移入培养基
内的量（ml）
1 2 3 4甲抗菌素原液
甲抗菌素稀释液
乙抗菌素原液
乙抗菌素稀释液
0.25 0.25 0.25 0.250.25 0.25 0.25 准备工作要提前，也就是平时定期对当地菌株做药敏试验。掌握每个时间段的敏感药物，要不到来病了现做就来不及了。或者说会耽误治疗时间效果。 请问有某种细菌对复合药的药敏实验方法吗？
现在的药都不是单一成分的药，这种方法实验时敏感，但在临床应用时有时候效果不是非常理想。 根据本地疫情做
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