vigoly-维奥兰羽 发表于 2013-5-9 08:22:13

IB(VN3)疫苗和IB(4∕91)疫苗交叉保护性检测---为您筛选IB疫苗作参考

鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)最早于1930年首次发现于美国北达科他州,鸡不是唯一的宿主,但目前只引起鸡的发病,各种年龄鸡都有易感性,雏鸡特别严重,可以起高死亡率,产蛋鸡虽死亡率低,但产蛋量和蛋的品质均显著下降。易感鸡与病鸡接触后48小时内出现症状,5-8天内全群暴发。传支的病原为鸡传染性支气管炎病毒(IBV),属于冠状病毒科冠状病毒属,该病毒有20多个血清型和更多的变异株, 有些血清型能产生交叉免疫,但各种血清型之间极少或没有交叉保护,给传支的预防带来极大的难度。已知血清型包括以引起呼吸道症状为主的Conn、Arkansas99等;以引起肾脏症状为主的M41、Australia“T”等;以引起“假母鸡”症状的为主的793B、VAR1变异株等。流行趋势:在国外,从2006年到2010间监测变异株占蛋鸡及种鸡传支的分离率逐年增高的趋势,分别为50%、58%、54%、46%、64%;在国内,从03年开始就陆续有学者分离出变异株。
793B的商品疫苗称作4/91,VAR1的商品疫苗称作VN3。本试验采用中和试验的方法,用VN3毒株制备的阳性血清分别中和4∕91和VN3病毒,证明两者之间的交叉保护性。
1. 实验材料及材料处理
VN3疫苗(1000羽份/瓶,VIGOLY)一支,4-91疫苗(1000羽份/瓶)一支,VN3阳性血清4ml(自制),10日龄SPF鸡胚35枚,生理盐水,10ml移液管,1ml移液管,1ml注射器5支,西林瓶,吸耳球,酒精灯,超净工作台,照蛋器等。
2. 实验方法
2.1 VN3疫苗稀释
VN3疫苗(1000羽份/瓶,VIGOLY),加入5ml 生理盐水充分溶解后,此时疫苗为200羽份/ml,再做10倍稀释到20羽份/ml备用,整个操作在超净工作台中进行。
2.2 4/91疫苗稀释
4/91疫苗(1000羽份/瓶)一支,加入5ml 生理盐水充分溶解,此时疫苗为200羽份/ml,再做10倍稀释到20羽份/ml备用,整个操作在超净工作台中进行。
2.3 中和与接种
实验分为VN3血清阴性对照组、VN3中和实验组、4-91中和实验组、VN3阳性对照组、4-91阳性对照组和空白对照组共6组,其中和配置见下表: 生理盐水疫苗稀释液20羽份/mlVN3血清中和接种
VN3血清阴性对照组
1ml

1ml
混合均匀后室温中和1小时,中间摇动一次。
经尿囊腔接种鸡胚0.1ml/枚,每组5枚胚。
VN3中和实验组

1ml
1ml
4-91中和
实验组

1ml
1ml
VN3阳性对照组
1ml
1ml

4-91阳性对照组
1ml
1ml

空白对照组
                            10枚同10龄鸡胚不接种。
2.4 孵育观察
接种后37℃下孵育观察7日,弃去接种后24小时内死亡鸡胚,24——144小时期间每日检出死胚,判定IB阴性或阳性,并记录结果。144小时后,将所有的死胚活胚取出并分开,放入冰箱冷冻,进行血凝试验检测,并剖检观察病变,其胎儿具有失水、蜷缩、发育小等特异性病痕者判为感染,据此进行计算。
3. 实验结果与分析
实验结果的判定标准为空白及阴性对照组:胎儿应发育正常,无失水、蜷缩、发育小等特异性病痕;取鸡胚尿囊液做血凝实验,应为阴性;阳性对照组:胎儿应有明显的失水、蜷缩、发育小等特异性病痕,取鸡胚尿囊液做血凝实验,应为阴性。
2012.06.21
inject
VN3阳性血清阴性对照
VN3中和实验组
4/91中和实验组
VN3阳性对照组
4/91阳性对照
空白对照
2012.06.22 24hr






2012.06.23 48hr



2(-)


2012.06.24 72hr






2012.06.25 96hr



1(-)


2012.06.26 120hr






2012.06.27 144hr



1(-)
2(-)

活胚
5N(-)
5N(-)
1P4N(-)
1P(-)
3P(-)
5N(-)
IB 感染阳性率%
0
0
20
100
100
0
备注 p:感染,N:未感染,-:血凝试验阴性
中和指数=(阳性对照组阳性率 - 中和组阳性率)/阳性对照组阳性率X100%
空白对照组5枚均未感染,说明SPF鸡胚正常;VN3阳性血清阴性对照组5枚均未感染,且血凝试验显示100%(-),说明VN3阳性血清接种的鸡胚与空白对照组一致,VN3血清符合要求,该组作为阴性对照成立;VN3阳性对照组5枚感染,100%(-),说明VN3疫苗毒株可使鸡胚100%感染,作为阳性对照成立;4/91阳性对照组5枚感染,100%(-),说明4/91疫苗毒株可使鸡胚100%感染,作为阳性对照成立;VN3中和实验组经VN3阳性血清中和后5枚未感染 ,说明VN3阳性血清可以100%中和VN3疫苗毒株, 中和指数为100%;4/91中和实验组经VN3阳性血清中和后为1P4N,中和指数80%,说明VN3阳性血清可以80%中和4/91疫苗毒株。
4. 实验结论;
本实验进行了VN3疫苗毒株与4/91疫苗毒株的交叉保护性。结果表明,VN3疫苗毒株与4/91疫苗毒株具有较高的交叉保护性,其交叉保护性为80%。

vigoly-维奥兰羽 发表于 2013-5-9 08:24:14

声明:发帖目的跟产品无关,各位看官可以参考一下替换和筛选疫苗的方法,毕竟现在4/91还没有正式的文号,大多是走私的,产品质量和供货都无法保证
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